Just Wanna Share Knowledge

Sebagaimana telah disinggung pada bab sebelumnya, bahwa mikroba seperi makhluk hidup lainnya memerlukan nutrisi pertumbuhan. Pengetahuan akan nutrisi pertumbuhan ini akan membantu di dalam mengkultivasi, mengisolasi dan mengidentifikasi mikroba.
Mikroba memiliki karakteristik dan ciri yang berbeda-beda di dalam persyaratan pertumbuhannya. Ada mikroba yang bisa hidup hanya pada media yang mengandung sulfur dan ada pula yang tidak mampu hidup dan seterusnya. Karakteristik persyaratan pertumbuhan mikroba inilah yang menyebabkan bermacam-macamnya media penunjang pertumbuhan mikroba.
Klasifikasi media pertumbuhan mikrobila terangkum dalam tabel di bawah ini :

Keterangan :
1)    Ireversibel = Sifat tidak dapat kembali lagi ke fase semula. Seperti darah yang telah berkoagulasi (menggumpal) tidak dapat lagi kembali menjadi darah cair.
2)    Reversibel = Sifat yang dapat kembali ke fase semula setelah perubahannya. Seperti agar yang dapat memadat apabila didinginkan dan dapat mencair kembali apabila dipanaskan lagi.
3)    Enrichment Media = Media yang dapat menunjang pertumbuhan bakteri yang rewel, yaitu bakteri yang memiliki persyaratan untuk tumbuh yang rumit. Bakteri ini tidak dapat tumbuh pada media biasa karena membutuhkan beberapa nutrisi pengaya yang dapat menyokong pertumbuhannya.
4)    Differential Media = Media yang digunakan untuk membedakan bentuk dan karakter koloni bakteri yang tumbuh. Beberapa bakteri dapat tumbuh di dalam media ini, tetapi hanya beberapa jenis saja yang mempunyai penampilan pertumbuhan yang khas. Media ini berguna untuk isolasi dan identifikasi bakteri.
5)    Selected Media = Media pertumbuhan yang terpilih dan khusus, maksudnya media ini dapat menghambat pertumbuhan tipe mikroba lain namun membiarkan tipe mikroba lain dapat tumbuh. Media ini sangat berguna untuk identifikasi.
6)    Test Media = Media yang digunakan untuk mengukur secara kuantitatif suatu vitamin maupun antibiotik.

Penyiapan Media
Media alamiah, misalnya susu skim, tidak begitu sulit di dalam penyiapannya sebagai media pertumbuhan mikroba, karena hanya cukup dengan dituang ke dalam wadah yang telah disterilkan. Media dalam bentuk kaldu nutrien atau yang mengandung agar, disiapkan dengan cara melarutkan masing-masing bahan yang dibutuhkan atau lebih mudah lagi dengan cara menambahkan air pada suatu produk komersial berbentuk medium bubuk yang sudah mengandung semua nutrien yang dibutuhkan.
Pada praktisnya, semua media tersebut secara komersial dalam bentuk bubuk, seperti PCA (Plate Count Agar), NA (Nutrient Agar), TSA (Trypticase Soy Agar) dan lain lain. Penyiapan media komersial ini pada umumnya mengikuti langkah-langkah sebagai berikut :
1.     Setiap komponen atau medium terhidrasi (bubuk) dilarutkan ke dalam aquades atau air suling pada volume yang tepat dan sesuai.
2.     pH media ditentukan dan disesuaikan dengan nilai optimum pertumbuhan mikroba sebagaimana tertera pada kemasan media komersial.
3.     Dituang ke dalam media yang sesuai, seperti erlenmeyer atau tabung labu dan disumbat dengan penutup yang kuat.
4.     Disterilisasi dengan suhu dan waktu yang adequate (memadai) sesuai dengan yang tertera pada kemasan. (Umumnya pada suhu 121^oC selama 15 menit).

Beberapa media yang umum digunakan

PLATE COUNT AGAR (Merck)
Formula : Casein-Peptone Glucose Yeast Extract Agar
Penyimpanan :
-          Simpan di tempat yang kering dan tertutup rapat.
-          Simpan pada suhu 15^oC – +25^oC.
-          Jaga dari cahaya.
Preparasi :
-          Larutkan 22.5 gram ke dalam 1 liter air distilasi (aquades) atau air deionisasi.
-          Panaskan dengan air mendidih atau aliran uap hingga homogen.
-          Sterilisasi ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121^oC.
-          pH akhir = 7.0 0.2 pada 25^oC.

NUTRIENT AGAR DEHYDRATED (Dafco Laboratories)
Formula per liter :
-          Bacto Beef Extract           : 3 gr
-          Bacto Peptone       : 5 gr
-          Bacto Agar            : 15 gr
Penyimpanan :
-          Simpan di tempat yang kering dan tertutup rapat.
-          Simpan pada suhu di bawah 30^oC.
-          Jaga dari cahaya.
Preparasi :
-          Larutkan 23 gram ke dalam 1 liter air distilasi (aquades) atau air deionisasi.
-          Panaskan dengan air mendidih atau aliran uap hingga homogen.
-          Sterilisasi ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121^oC-124^oC.
-          pH akhir = 6.8 + 0.2 pada 25^oC.
TRYPTIC SOY BROTH (Merck)
Formula gr/liter :
-          Peptone Casein                                   : 17 gr
-          Peptone Soymeal                               : 3.0 gr
-          b(+) Glucose                                      : 2.5 gr
-          Sodium Chloride                                 : 5.0 gr
-          diPottasium hydrogenophosphate        : 2.5 gr
Penyimpanan :
-          Simpan di tempat yang kering dan tertutup rapat.
-          Simpan pada suhu 15^oC – +25^oC.
-          Jaga dari cahaya.
Preparasi :
-          Larutkan 30 gram ke dalam 1 liter air distilasi (aquades) atau air deionisasi.
-          Panaskan dengan air mendidih atau aliran uap hingga homogen.
-          Sterilisasi ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121^oC.
-          pH akhir = 7.3 0.2 pada 25^oC.

TRYPTIC SOY AGAR (Merck)
Formula gr/liter :
-          Peptone Casein      : 15 gr
-          Peptone Soymeal   : 5.0 gr
-          Sodium Chloride     : 5.0 gr
-          Agar-agar              : 15 gr
Penyimpanan :
-          Simpan di tempat yang kering dan tertutup rapat.
-          Simpan pada suhu 15^oC – +25^oC.
-          Jaga dari cahaya.
Preparasi :
-          Larutkan 40 gram ke dalam 1 liter air distilasi (aquades) atau air deionisasi.
-          Panaskan dengan air mendidih atau aliran uap hingga homogen.
-          Sterilisasi ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121^oC.
-          pH akhir = 7.3 0.2 pada 25^oC.

BACTO^TM PEPTONE (Difco-Becton Dickinson)
Protein pencernaan enzimatis
Penyimpanan :
-          Simpan di tempat yang kering dan tertutup rapat.
-          Simpan pada suhu 2^oC – 30^oC.
-          Jaga dari cahaya.
Preparasi :
-          Larutkan 1 gram ditambah 9 gr NaCl (garam) ke dalam 1 liter air distilasi (aquades) atau air deionisasi.
-          Panaskan dengan air mendidih atau aliran uap hingga homogen.
-          Sterilisasi ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121^oC.